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α-N-乙酰半乳糖胺酶的表达及活性检测

林毅刚 王宇萌 夏钢

林毅刚, 王宇萌, 夏钢. α-N-乙酰半乳糖胺酶的表达及活性检测[J]. 华东师范大学学报(自然科学版), 2012, (4): 67-74.
引用本文: 林毅刚, 王宇萌, 夏钢. α-N-乙酰半乳糖胺酶的表达及活性检测[J]. 华东师范大学学报(自然科学版), 2012, (4): 67-74.
LIN Yi-gang, WANGYu-meng, XIA Gang. Overexpression and characterization of a bacterial α-N-acetylgalactosaminidase[J]. Journal of East China Normal University (Natural Sciences), 2012, (4): 67-74.
Citation: LIN Yi-gang, WANGYu-meng, XIA Gang. Overexpression and characterization of a bacterial α-N-acetylgalactosaminidase[J]. Journal of East China Normal University (Natural Sciences), 2012, (4): 67-74.

α-N-乙酰半乳糖胺酶的表达及活性检测

详细信息
  • 中图分类号: Q55

Overexpression and characterization of a bacterial α-N-acetylgalactosaminidase

  • 摘要: 为了建立新型-N-乙酰半乳糖胺酶的筛选、检测方法,实验中提取脑膜金黄杆菌的基因组DNA,以此为模板PCR扩增出-N-乙酰半乳糖胺酶(A4).将A4克隆至pET-24a载体,转化Bl21表达菌株进行蛋白表达.使用亲和层析方法纯化His-A4酶,选择显色底物验证酶活性.同时,改进了传统的ELISA方法,直接将红细胞膜包被于ELISA检测平板中,以红细胞膜表面抗原作为直接底物,用ELISA方法检测酶活性.此研究建立了新型ELISA实验方法,以此方法验证了A4酶的活性,证明了此酶能够有效降低红细胞表面抗原抗体反应,且具有浓度和时间依赖性.
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出版历程
  • 收稿日期:  2011-05-01
  • 修回日期:  2011-08-01
  • 刊出日期:  2012-07-25

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