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盘基网柄菌allC的克隆、表达和多克隆抗体的制备

陈能星 魏晓静 刘伟 侯连生

陈能星, 魏晓静, 刘伟, 侯连生. 盘基网柄菌allC的克隆、表达和多克隆抗体的制备[J]. 华东师范大学学报(自然科学版), 2010, (4): 77-84.
引用本文: 陈能星, 魏晓静, 刘伟, 侯连生. 盘基网柄菌allC的克隆、表达和多克隆抗体的制备[J]. 华东师范大学学报(自然科学版), 2010, (4): 77-84.
CHEN Neng-xing, WEI Xiao-jing, LIU Wei, HOU Lian-sheng. Clone, expression of allantoicase gene from Dictyostelium disc-oideum and preparation of polyclonal antibody against ALC[J]. Journal of East China Normal University (Natural Sciences), 2010, (4): 77-84.
Citation: CHEN Neng-xing, WEI Xiao-jing, LIU Wei, HOU Lian-sheng. Clone, expression of allantoicase gene from Dictyostelium disc-oideum and preparation of polyclonal antibody against ALC[J]. Journal of East China Normal University (Natural Sciences), 2010, (4): 77-84.

盘基网柄菌allC的克隆、表达和多克隆抗体的制备

详细信息
    通讯作者:

    侯连生

  • 中图分类号: Q255

Clone, expression of allantoicase gene from Dictyostelium disc-oideum and preparation of polyclonal antibody against ALC

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    Corresponding author: HOU Lian-sheng
  • 摘要: 运用RT-PCR技术从盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)总mRNA中克隆到了尿囊酸酶基因(allC),该基因编码区开放读框长1 100 bp,编码的蛋白约42 kD.由于是在野生型和突变型细胞中差异表达的片段,表明该基因在盘基网柄菌多细胞发育中起到重要作用,因此将allC克隆入融合表达载体pET-32a(+) ,在大肠杆菌E.coliBL21(DE3) 中进行诱导表达带有6个组氨酸标签的尿囊酸酶(ALC)融合蛋白,经镍柱亲和层析,获得了电泳纯蛋白.用纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体.ELISA 测得制备的抗ALC蛋白的多克隆抗体的效价可达1∶64 000,Western Blotting检测证明该抗体有较强的针对ALC蛋白的专一性.这些数据表明重组质粒表达的ALC融合蛋白具有良好的抗原性,制备ALC的多克隆抗体有良好特异性和效价,能够满足针对ALC免疫印迹和细胞内定位检测等实验要求,为深入研究ALC蛋白在盘基网柄菌多细胞发育的功能作用提供了有力工具.
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出版历程
  • 收稿日期:  2009-03-01
  • 修回日期:  2009-07-01
  • 刊出日期:  2010-07-25

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